東坑送菜服務 推薦 高效液相色譜-質譜聯用法測定水果蔬菜中的多菌靈殘留量方法的研

    

【關鍵詞】  高效液相色譜 質譜 多菌靈 農藥殘留 水果 蔬菜

    多菌靈(carbendazim)又稱苯駢咪唑44號，化學名稱為2-(甲氧基氨基甲酰)苯駢咪唑，是一種廣譜、高效、內吸性殺真菌農藥， 對菌核病、炭疽病、枯萎病等都有防治效果，已普遍應用于水果蔬菜消費。由于其化學性質穩定， 可以耐久地殘留在果品蔬菜中，招致多菌靈殘留累積，可經過食物鏈影響人體安康。研討標明， 多菌靈能惹起肝病， 還能招致染色體畸變等病癥［1］。目前測定多菌靈的剖析辦法主要有液相色譜法［2，3］、分光光度法［4］。高效液相色譜法常用紫外檢測器，由于其選擇性差，靈敏度遭到限制，不同的樣品必需采用不同的色譜條件，對檢測干擾極大，辦法的通用性和耐用性不強。為此，本實驗采用高選擇性、高靈敏度的質譜檢測器，以常見水果蔬菜為研討對象，樹立了檢測多菌靈殘留的液相色譜-質譜聯用辦法。

    實驗局部

    主要儀器與試劑：1100型高效液相色譜-質譜聯用儀(agilent科技有限公司)，配在線脫氣機、四元低壓泵、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、電噴霧四級桿質譜檢測器，儀器控制和數據采集剖析運用chemstation工作站； 超純水系統(歷元電子儀器公司)，ks-300d 系列超聲波清洗器，300w(科生儀器廠)。r2200型旋轉蒸發儀(buchi公司)；甲醇(剖析純)，四氫呋喃、甲醇(色譜純， merck公司) ；nacl、naoh、石油醚(沸程30～60℃)、二氯甲烷(剖析純)；無水硫酸鈉：運用前在500℃馬弗爐中灼燒4小時；hcl(剖析純)；多菌靈規范品(dr.ehrenstorfer公司)。

    規范溶液配制：精確稱取規范品，用甲醇溶解配成濃度為100mg/l的規范儲藏液。運用時用甲醇逐級稀釋成濃度為0.020～2.0mg/l的規范溶液。

    樣品預處理：精確稱取粉碎混勻后的樣品25.0g于100ml具塞三角燒瓶中，加入50ml甲醇和10ml 0.1mol/l hcl，攪拌均勻，超聲振蕩提取2小時，用布氏漏斗抽濾，以少量甲醇清洗殘渣，合并濾液于150ml圓底燒瓶中，在40℃水浴上濃縮，基本除去甲醇。將濃縮液轉移至125ml分液漏斗中，加入10ml 0.1mol/l鹽酸和50ml 10% nacl溶液，混合均勻，再加入25ml石油醚劇烈振蕩。靜置分層后，棄去石油醚，水相用2mol/l naoh溶液調節ph至6.5～8.5，用二氯甲烷萃取3次，每次20ml。合并二氯甲烷，以無水硫酸鈉干燥，將濾液轉移至150ml圓底燒瓶中，在40℃水浴中減壓蒸發至干，最后用甲醇溶解定容至1.0ml。

    高效液相色譜-質譜條件：色譜柱，dikma diamonsil c18 (4.6mm i.d.×250mm，5μm)；流動相，4%四氫呋喃水溶液(a)∶甲醇(b)=7∶3；流速，0.6ml/分；柱溫，30℃；檢測波長，282nm；進樣量，10μl。

    質譜檢測選擇正離子選擇離子檢測(sim)模式，以m/z192和m/z160為定性檢測離子對，m/z192為定量檢測離子，干燥氣為氮氣，流速10l/分，干燥氣溫度350℃，毛細管電壓3500v，裂解電壓100v。

 結果與討論

    樣品前處理條件的選擇：多菌靈是一種兩性化合物，在中性和偏堿性水溶液中溶解度低，微溶于丙酮、乙酸乙酯和氯仿等有機溶劑。實驗比較了在酸性條件下，甲醇和水提取多菌靈的效果。取空白蔬菜，加入多菌靈規范溶液，然后分別用水和甲醇提取，同前述辦法凈化。結果甲醇-鹽酸法回收率高，而水提法回收率不到50%，故選擇醇提法。在甲醇中加入酸液使多菌靈成鹽，用石油醚除去脂溶性物質。再加入naoh溶液，調整ph至6.5～8.5，使多菌靈轉成原形，再用有機溶劑萃取，從而達到純化、富集多菌靈的目的。

    流動相的選擇：實驗中發現以甲醇-水為流動相洗脫時，多菌靈峰型寬而且拖尾。經過反復實驗，選擇了四氫呋喃作為調節劑，使峰型得到改善； 采用4%四氫呋喃水溶液(a)∶甲醇(b)=7∶3。

    質譜辦法的優化：實驗發現，用dad檢測器在紫外波長282nm下進行檢測，多菌靈信號被掩蓋，無法精確定量。而用靈敏度和選擇性更高的質譜檢測器在選擇離子監測模式下進行檢測，多菌靈響應明顯。與dad檢測器相比，質譜檢測器采用sim模式后，檢測靈敏度顯著提高，目標物在紫外光下無響應，但在質譜中有很強的響應。同時質譜抗干擾強，檢出限低，定量結果更趨精確和真實，辦法耐用性更強；用掃描模式在m/z 120～220范圍掃描。質譜中的準分子離子m/z192［m+h］+為基峰，m/z16為［m-ch3o］+，m/z 214為［m+na］+。因此，實驗選取m/z192和m/z160作為監測離子對進行定性，將m/z192用于多菌靈的定量測定。

    規范曲線及辦法檢出限：將規范儲藏液用甲醇稀釋成濃度分別為0.02、0.04、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、3.00和4.00mg/l的規范溶液。在相同的色譜及質譜條件下，測定多菌靈的峰面積。以峰面積對進樣濃度作圖，繪制規范校正曲線。在含量為0.02～4.00mg/l范圍內得出規范曲線，線性回歸方程為y=5.028×107x+2.324×105，相關系數r=0.9994。取空白樣品提取液，加入一定量的多菌靈規范品，以信噪比的3倍來確定辦法的檢出限為0.12mg/l(rsd<5%)。

    實際樣品的測定結果：測定結果見表1，多菌靈的平均加樣回收率為95.5%～103.2%；最大相對規范偏差為4.3%。測定結果令人滿意。不同產品中多菌靈的最高殘留限量為0.5mg/kg，本辦法的靈敏度完全可以達到剖析要求。采用三波長分光光度法測定水果蔬菜中多菌靈的殘留量，辦法簡單，測定結果精確，辦法重現性好。

【參考文獻】
1 張建新,杜雙奎,楊小姣.陜西省主要蔬菜產區多菌靈農藥殘留剖析與評價.安全與環境學報,2005,5(6):78-80.
2 李桂風,郝征紅,董淑敏,等.花生中多菌靈殘留量的高效液相色譜剖析辦法的研討.剖析測試學報,1998,17(3):69-70.
3 bernal j.l.,del nozal m.j,et al.high-performance liquid chromatographic determination of benomyl and carbendazim residues in apiarian samples.journal of chromatography a,1997,787:129-136.
4 默濤,陳鶴鑫,陸貽通,等編著.農藥殘留量剖析辦法.上海:上海科學技術出版社,1992:201-203.